包装组成

50个迷你制备剂：RNeasy迷你离心柱、gDNA消除离旋柱、采集管、无RNase水和缓冲液

特色

• 使用独特的gDNA消除器柱或平板高效去除gDNA（无需DNase）
• 使用快速且简单的提取方案，几分钟内获得高质量的总RNA
• 无酚RNA分离
• 96孔格式的高通量处理
• 非常适合实时RT-PCR和RNA测序等敏感应用

产品详情

RNeasy Plus套件是下一代QIAGEN的RNA提取套件，结合了高质量的RNA纯化和有效的gDNA去除，采用独特的gDNA消除柱或板。从多种培养细胞和易裂解组织中获得高纯度和高产率的总RNA。RNeasy Plus微型套件专为有限样本量设计，可分离出最多45微克纯RNA。RNeasy Plus迷你套装通过高效去除gDNA，一次提取即可纯化多达100微克RNA（>200 nt）。这两种试剂盒均可在QIAcube Connect上实现自动化，样本可方便地使用RNAprotect组织试剂或Allprotect组织试剂稳定，并可通过TissueRuptor II、TissueLyser II或LT系统高效破坏（单独购买）。RNeasy Plus 96 试剂盒用于高通量纯化在 96 孔板中培养的培养细胞中的总 RNA。

性能

使用RNeasy Plus微型和迷你套件从细胞和组织提取RNA可实现高且可重复的RNA产率和高效的基因组DNA消除，适用于敏感应用（参见图“有效细胞基因组DNA去除”、“有效组织基因组DNA去除”、“高且可重复的RNA产率”和“阵列准备RNA”）。常规从组织和培养细胞中获取的Agilent RIN值接近10的总RNA。

RNeasy Plus 微型和迷你套件还提供mRNA富集，因为大多数RNA<200核苷酸（如rRNA和tRNA）被排除。为了从培养细胞中分离含小RNA（如miRNA）的总RNA，提供了额外的RNA分离方案，详见《RNeasy Plus Micro手册》及RNeasy Plus Mini Kit的独立补充协议。
RNeasy Plus 96套件兼容多种细胞系，纯化高质量RNA，Agilent RIN值接近10（见图“高质量RNA”）。该试剂盒实现的完全基因组DNA去除（见图“有效的基因组DNA去除”）使得在高灵敏度应用中实现特异性转录本检测，如低丰度靶点的定量实时RT-PCR分析。此外，从10.2到10.6细胞的可靠RNA纯化支持在宽动态范围内实时RT-PCR定量（见图“可靠RNA纯化”）。

原理

RNeasy Plus手术将QIAGEN创新的双链DNA选择性结合技术与成熟的RNeasy技术相结合。保证高效纯化高质量RNA，无需额外的DNA酶消化。纯化后的RNA已准备好使用，非常适合对低量DNA污染敏感的下游应用，如定量实时RT-PCR。

细胞和易裂解组织首先被用含有高变性鸟嘌呤-异硫氰酸酯的Buffer RLT Plus酶来裂解和均质化，该产品能立即使RNase失活，以确保完整RNA的分离。裂解液随后通过gDNA消除自旋柱或gDNA消除蛋白96板，结合高盐缓冲液，选择性且高效地去除基因组DNA。加入乙醇以提供适当的RNA结合条件，样品被施于RNeasy自旋柱或96孔板上。这些专用柱和96孔板含有一层硅膜，专门结合裂解细胞的RNA。
对于脂肪和难以裂解的组织，推荐使用RNeasy Plus通用套装。对于分离包括miRNA在内的其他样本类型的总RNA，我们推荐miRNeasy套件。

QIAwave RNA Plus 迷你套件是我们标准 RNeasy Plus 迷你套件的环保版本。该版本分别将塑料和纸板使用量分别减少47%和42%，采用100%回收塑料制成的废管，可在过程中重复使用。QIAwave缓冲液以浓缩液形式提供，每瓶可减少多达90%的塑料使用量。尽管外观有差异，QIAwave套件依然用户友好，化学反应和性能与标准套件完全相同。

我们与My Green Lab合作，还评估了RNeasy Plus迷你套件（50/250）和QIAwave RNA Plus迷你套件（50/250）的环境影响。我的绿色实验室ACT（问责、一致性和透明度）环境影响因子标签旨在根据多个可持续性标准评估和评分产品。这些包括：

• 制造
• 负责任的化学品管理
• 产品和包装材料中的可持续内容
• 包装在使用寿命结束时的处理

程序

RNeasy Plus 微型套件可从最多 5 x 105 细胞或 5 mg 组织中提取总 RNA，而 RNeasy Plus Mini Kit 则可从最多 107 个细胞或 30 mg 组织中分离出总 RNA。简短的工作流程可在25分钟内完成RNA分离，完成基因组DNA去除（详见RNeasy Plus流程图）。样本首先被裂解并均质化。裂解液通过gDNA消除剂离心柱，加入乙醇，样品被施用RNeasy自旋柱。RNA结合在膜上，污染物被冲刷掉。高品质RNA可在使用RNeasy Plus微型套件的14微升水中或使用RNeasy Plus Mini套件在30微升水中洗脱。

针对不同起始材料，有不同的协议可用。这些方案主要区别在于样品的裂解和均质化。一旦样品被应用于gDNA消除剂自旋柱，作流程类似。该过程对mRNA进行了富集，因为大多数RNA<200个核苷酸，如rRNA和tRNA）被排除在外。

在Buffer RLT Plus（随RNeasy Plus Mini套件附带）中破坏和均质组织时，可能会出现过度泡沫。在开始破坏和均质化前，将单独供应的试剂DX加入缓冲液RLT Plus，可大幅减少这种起泡现象。试剂DX已通过试剂盒进行严格测试，对A级纯度或后续应用无影响。

通过使用RNeasy 96板实现高通量RNA纯化。在应用于RNeasy 96板之前，细胞裂解液首先通过gDNA消除剂96板（见图“RNeasy Plus 96程序”）。gDNA消除器96型平板便于使用离心机（离心机4-16）进行处理。使用RNeasy 96板进行RNA纯化是手动的，包含三个简单步骤：结合、洗涤和洗脱。这些板材通过离心机（离心机4-16和板转子2×96）或真空（QIAvac 96）与离心机的组合快速且便捷地处理。使用离心机处理板材时，最多可使用2 x 106单元作为起始材料;而在使用真空和离心机处理板材时，最多可使用1 x 106单元。该过程对mRNA进行了富集，因为大多数RNA<200个核苷酸，如rRNA和tRNA）被排除在外。RNeasy Plus程序可以修改，以纯化培养细胞中含有小RNA（如miRNA）的总RNA。

RNeasy Plus Mini标准协议也可以通过Gilson的TRACKMAN Connected系统与PIPETMAN M Connected移液器配合执行。TRACKMAN Connected 系统引导研究人员了解 RNeasy Plus Mini 协议，同时自动调整支持蓝牙的 PIPETMAN M Connected 移液器设置。协议执行的每一步都会被记录下来，通过生成全面的运行报告来加速报告。