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TNF-α 定量分析酶联免疫检测实验过程及实验仪器

发布日期:2014-08-20 09:05:13 【关闭】
摘要:
酶联免疫检测实验?...

TNF-α 定量分析酶联免疫检测实验过程及实验仪器

【实验目的】

体外检测小鼠血清中TNF-α的浓度,了解小鼠攻毒后对TNF-α的变化的影响

【实验原理】

将酶与试剂抗原用交联剂结合起来,此种酶标记抗原与抗本中相应抗体发生特异反映,并牢固结合,在加入相应的酶的底物时,底物被酶催化生成呈色产物,可根据呈色物的有无和呈色深浅作定性或定量观察。本实验采用双抗夹心Elisa法检测样本中小鼠TNF-α的浓度

【实验试剂和器材】

试剂:TNF-α定量分析酶联免疫检测试剂盒

器材:4℃和-20℃冰箱、水浴锅、恒温箱、酶标仪、电脑、排枪、移液枪、加样槽、涡旋振荡器、枪头、96孔板

【实验步骤】

用去离子水将洗涤液稀释到1倍(用到移液器);将不同浓度标准品(100ul/孔)加入相应空中(96孔板、移液器),对于血清先加入50ul样本分析缓冲液后加50ul血清,若稀释量大,就将样本与样本分析缓冲液等量加入,不足部分用标准品稀释液补充至100ul,用封板胶纸封住反应孔,室温孵育120min(漩涡振荡器、恒温箱);`用1倍洗涤液洗板5次,且最后一次至厚吸水纸上拍干;加入生物素化抗体工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔,室温孵育60min;洗板5次,且最后一次至厚吸水纸上拍干(多孔道手动移液器);加入酶结合物工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔,避光室温孵育20min;洗板5次,且最后一次置厚吸水纸上拍干;加入显色剂TMB100ul孔,避光室温孵育20min,加入终止液50ul/孔,混匀后即可测量OD450值(电脑、酶标仪)

【注意事项】

1、ELISA实验是一个很精确的实验过程,所以要精确稀释和加样

2、恒温箱中反应时,要严格按照上面的时间,不易过长

3、也可用洗板机洗板5次

4、反映终止后要快速测OD值,保证结果的准确性

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